Tratamiento del Virus del Papiloma Humano
Se consideró que había persistencia del padecimiento cuando después del Tratamiento del Virus del Papiloma Humano se encontró lesión (Papanicolaou y colposcopia) y ADN del virus del papiloma humano antes de un año del tratamiento.
Se consideró que había recurrencia del padecimiento cuando tenían lesión y ADN del virus del papiloma humano después de un año del tratamiento. Se seleccionó a mujeres sexualmente activas, con diagnóstico de lesiones intraepiteliales escamosas de bajo grado y con infección por el virus del papiloma detectada por reacción en cadena de la polimerasa, que no se realizo el Tratamiento del Virus del Papiloma Humano, de la lesión ni la infección.
Para el estudio citológico se realizaron dos extendidos exocervicales con una espátula y se aseguró la muestra de la zona de transformación escamocolumnar y de la lesión visible; con un cepillo cervical se obtuvo la muestra endocervical. El cepillo cervical con la muestra endocervical, para el estudio molecular, se colocó en un tubo Eppendorf con solución de lisis compuesta por Tris 10 mm ph 8.0, EDTA 20 mm ph 8.0 y SDS 0.5%; todo en condiciones de esterilidad. Para obtener el ADN cervical se lavaron con fenol-cloroformo-alcohol-isoamílico, previa incubación en un baño metabólico con proteinasa K (100 mg/mL) a 65°C. Esto con el propósito de degradar las proteínas del medio. Después se realizaron cuatro lavados con fenol-cloroformo-alcohol-isoamílico, se mezclaron con vortex durante 45 segundos y se centrifugaron 5 minutos a 1,400 rpm a 4°C. El fenol, al igual que el cloroformo, tienen la función de desnaturalizar activamente las proteínas y se obtienen tres fases: acuosa, proteica y de restos celulares y fenólicos. Se recuperó la fase acuosa, se agregó LiCI 8M para separar el RNA de la muestra, se centrifugó durante cinco minutos a 1,400 rpm, se recuperó nuevamente la fase acuosa en un tubo Eppendorf limpio y se agregó NaCI 5M.
Se agitó por unos segundos y se le agregó isopropanol para visualizar la hebra de ADN y para tenerlo libre de sales se utilizó etanol al 70%. Cuando se obtuvo el ADN se resuspendió en 55 µL de agua desionizada estéril y se midió su concentración y pureza en un espectrofotómetro de luz ultravioleta. Después, al ADN se le realizó la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa.35 Amplificación del ADN viral por reacción en cadena de la polimerasa A la muestra de ADN genómico se le aplicó la técnica de la PCR con los iniciadores MY09 y MY11 de Bauer y Manos, que son complementarios a una región del gen LI del VPH, la cual se conserva y el producto de la amplificación es de aproximadamente 450 pb.
Tratamiento del Virus del Papiloma Humano
